Cercetare

Activitatea Departamentului de Reglare Genică și Terapii Moleculare este interdisciplinară și utilizează tehnici de ultimă generație în biologie moleculară, biochimie și transducție virală în experimente pe culturi celulare și modele animale.

Rezultatele sunt relevante pentru biologia celulară (transcitoză, receptori celulari), expresia genelor, reglarea proteinelor implicate în metabolismul lipidic și bolile cardiovasculare, precum și dezvoltarea de noi strategii terapeutice. Principalele noastre descoperiri s-au concentrat pe biologia celulelor endoteliale, transportul placentar și procesele mediate de receptori și sunt legate de:

• Transcitoza macromoleculelor și compoziția caveolelor

• Receptorii IgG în endoteliul placentar

• Receptorii transferinei și transcitoza

Descoperirile în domeniul reglării genelor conturează o rețea de reglare coerentă în care semnalele inflamatorii și indiciile metabolice modelează expresia genelor apolipoproteinelor (în special ApoE și ApoC-II) în macrofage și celulele asociate bolilor cardiovasculare, cu implicații directe asupra aterogenezei, biologiei HDL și stresului oxidativ. Rezultatele definesc punctele de control transcripțional (STAT1, NF-κB, AP-1, KLF4, CREB, RXRα) și factorii modulatori (glucocorticoizi, hormoni tiroidieni, homocisteină, endotoxină, metformină):

• Semnalizarea inflamatorie afectează promotorul ApoE

• STAT1 ca activator selectiv al macrofagelor prin buclarea cromatinei

• KLF4 și CREB acționează sinergic pentru a potența expresia ApoE

• Homocisteina suprimă ApoE prin NF-κB

• Glucocorticoizii acționează asupra expresiei ApoE în mod diferențiat în funcție de tipul de celulă

• Endotoxina reglează negativ ApoE, iar metformina atenuează efectul

• Hormonii tiroidieni reglează pozitiv ApoE în astrocite

• Cooperativitatea STAT1–RXRα induce o creștere a ApoC-II în macrofage.

• Reglarea negativa a ApoA-I de catre bisfenolul A prin NF-κB

Cercetarea translațională s-a concentrat pe ingineria celulelor stromale mezenchimale (MSC) pentru a supraexprima ligandul Fas și, astfel, pentru a le spori capacitățile imunosupresive și citotoxice. Am stabilit o metodă pentru producția adenovirală și transducția optimizată a MSC murine, făcând abordarea practică și reproductibilă. Principalele descoperiri sunt:

• Producerea unei minigene a FasL integrate in adenovirus

• Transducția MSC

• Supraexpresia FasL în MSC crește capacitatea acestora de a suprima și distruge celulele imune activate

• MSC-FasL prezintă o supresie îmbunătățită a celulelor T și a altor efectori imuni

În prezent, analizam lipoproteinele, identificand funcțiile diverselor apolipoproteine în metabolismul lipidic și interacțiunile acestora cu metabolismul glucozei și al energiei. Pe lângă tehnicile clasice, precum ultracentrifugarea, Western blot și PCR în timp real, utilizăm și instrumente moderne de investigare, inclusiv respirometria mitocondrială de înaltă rezoluție (echipament Oroboros). Putem determina subfracțiile lipoproteinelor folosind sistemul de testare a subfracțiilor lipoproteinelor de la Quantimetrix, un dispozitiv de diagnostic in vitro care măsoară nivelurile de colesterol în toate fracțiile lipoproteinelor și subfracțiile LDL din serul sau plasma de pe stomacul gol. Gelurile electroforetice sunt analizate cu Lipoware, un program software configurat care calculează nivelurile de colesterol din fiecare subfracție.